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蒲公英提取物检测方法

管理员来源于网络7242020-03-12 20:06
1.供试品溶液的制备:取蒲公英提取物1 g,加甲醇20 ml,加热回流30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10 ml使溶解,滤过,滤液用醋酸乙酯振摇提取2次,10 ml/次,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
2.对照品溶液的制备:取咖啡酸对照品,加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液。另取绿原酸对照品,加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。
3.薄层层析:吸取上述3种溶液各6 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检测。供试品色谱中,在与对照品相应位置上,显相同颜色的荧光斑点。
▲含量测定:色谱柱Agilent Hypersil ODS柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(pH4.0):(23∶77),检测波长323nm,柱温25℃,流速为1.0ml/min。灵敏度:1.0AUFS;理论塔板数按咖啡酸峰计算应不低于3000,咖啡酸峰与其他峰能达到基线分离,且出峰时间适宜,峰形较好。 1.对照品溶液的制备:分别精密称取在110℃干燥至恒重的绿原酸和咖啡酸对照品各2.5 mg,置50 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取5ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得0.025 mg/ml的对照品溶液。 2.供试品溶液的制备:取蒲公英提取物干粉0.5g,精密称定,置100ml具塞锥形瓶中,精密加含5%甲酸的甲醇溶液50ml,密塞,摇匀,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30min,取出,放冷,再称定重量,用含5%甲酸的甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,离心,取上清液,用微孔滤膜(0.22 μm)滤过,滤液置棕色量瓶中,即得。
3.线性关系考察:分别精密称取在110℃干燥至恒重的绿原酸和咖啡酸对照品各2.5mg,置50ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,再用甲醇逐级稀释得0.05,0.025,0.0125,0.00625,0.003 125 mg/ml 5个不同浓度的对照品溶液,分别进样10μl,测定其峰面积,然后分别以绿原酸和咖啡酸的浓度为横坐标,5次测定峰面积的均值为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程为绿原酸:Y=3×107X-24923,R2=0.9995;咖啡酸:Y=5×107X+8 862.3, R2=0.999 9。实验结果表明绿原酸和咖啡酸的浓度在0.003125~0.05 mg/ml范围内均与所测得的相应峰面积呈良好的线性关系。

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